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        慢病毒包裝

        慢病毒包裝

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        科佰生物擁有豐富的病毒包裝經驗,成功為很多客戶包裝出需要的病毒,并且完成相應的功能檢測。

        慢病毒包裝的詳細資料:

        慢病毒包裝 
        慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統,它能高效的將目的基因(或RNAi)導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA,其基因組進入細胞后,在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白;或產生RNAi干擾。
        慢病毒載體介導的基因表達或RNAi干擾作用持續且穩定,原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中,并隨細胞基因組的分裂而分裂。另外,慢病毒載體能有效感染并整合到非分裂細胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比,比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關病毒載體、只整合分裂細胞的傳統逆轉錄病毒載體,有鮮明的特色。大量文獻研究表明,慢病毒載體介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、巨噬細胞等。
        慢病毒載體不表達任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位無細胞免疫反應,體液免疫反應也較低,不影響病毒載體的第2次注射。

        慢病毒包裝的優點:

        1、能將外源基因有效整合入宿主染色體,外源基因表達水平較高、表達穩定;

        2、廣泛的宿主,可感染分裂和不分裂的細胞,幾乎可以感染所有類型的細胞,特別適合質粒載體轉染效率低的細胞;

        3、適用范圍廣,可用于體外細胞系和活體動物模型,研究基因和RNAi等;

        4、轉導效率高,不需要轉染試劑,目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加。

        科佰生物擁有豐富的病毒包裝經驗,成功為很多客戶包裝出需要的病毒,并且完成相應的功能檢測。

        慢病毒概述:

        慢病毒( Lentivirus)屬于逆轉錄病毒科(Retroviridae),為RNA病毒,如人免疫缺陷病毒(HIV)、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于對HIV-1的研究較廣泛深入,對其生物學特性較為了解,因此HIV-1來源的慢病毒載體已成為其中的代表。

        HIV-1為雙鏈RNA病毒,共有9個基因,如圖1所示。gag、pol、env3個基因編碼病毒的基本結構,tat、rev為調節基因,vif、vpr、vpu、nef 4個為輔助基因。其中,gag基因編碼病毒的核心蛋白,包括基質蛋白、衣殼蛋白、核衣殼蛋白;pol基因編碼病毒復制所需的酶,如反轉錄酶、整合酶、蛋白酶,env基因編碼病毒的包膜糖蛋白,決定病毒感染宿主的靶向性。rev編碼的蛋白調節gag、pol、env的表達水平,tat編碼的蛋白參與RNA轉錄的控制。4個輔助基因編碼的蛋白則作為毒力因子參與宿主細胞的識別和感染。兩端為長末端重復序列(LTR),內含復制所需的順式作用元件,如包裝信號元件Ψ。

        *代慢病毒載體系統是以三質粒系統為代表,該系統由包裝質粒、包膜質粒及載體質粒3種質粒組成。包裝質粒是HIV-1前病毒基因組5’端LTR由巨細胞病毒早期啟動子取代,3LTRSV40 polyA序列取代。包裝成分分別構建在兩個質粒上,一個表達gagpol,另一個表達env。載體質粒攜帶了5’端LTR,和全部5’端非翻譯區域,另外還帶有rev應答元件(RRE)。包膜表達質粒使用水皰性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用來代替了原病毒的env基因。

        第二代慢病毒載體系統是在*代的基礎上進行改進,在包裝質粒中刪除了HIV的所有輔助基因(vif、vpr、vpunef基因)。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和感染能力,同時增加了載體的安全性。

        第三代慢病毒載體系統由四質粒代替原有的三質粒包裝系統。將rev基因單獨放在一個包裝質粒上。同時又增加了兩個安全特性:一是構建自身失活的慢病毒載體,即刪除了U3區的3LTR,使載體失去HIV-1增強子及啟動子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出RNA;二是去除了tat基因,用異源啟動子序列代替,這樣原始的HIV-1基因組中的9個慢病毒載體中只保留了3(gag、polrev)。因此第三代慢病毒載體系統更加安全。

        技術路線:

        1.獲得目的基因序列;

        2.構建慢病毒載體;

        3.重組質粒和包裝質粒共轉,包裝病毒;

        4.病毒純化、濃縮;

        5.滴度測定。

        6.對照組和實驗組感染細胞,利用抗生素篩選,得到穩定單克隆細胞株(可選)。

        案列展示:

        服務說明:

        1.客戶提供目的基因的序列,如果提供模板,請告知載體、酶切穩點等信息;

        2.若實驗材料為原代細胞或者特殊培養的細胞,請先咨詢;

        3.公司默認提供病毒滴度為1x107-1x108TU/ml,規格1ml;

        4.目的蛋白的功能驗證另外收費。

        提交的產品和資料:

        1.實驗報告;

        2.構建好的病毒重組質粒;

        3.提供至少1ml滴度>1x108-1x109TU/m的病毒.


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