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        穩定細胞株構建

        穩定細胞株構建

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        康佰生物在穩定細胞株構建上擁有豐富的經驗,熟悉每一步操作,尤其對關鍵步驟有獨到的經驗,成功為眾多科研客戶構建目的細胞株(過表達、可誘導過表達、沉默、可誘導沉默、報告基因等等)。

        穩定細胞株構建的詳細資料:

        穩定細胞株構建服務: 
        構建穩定細胞系的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉染到宿主細胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含的抗性標志進行篩選。常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418來代替新霉素進行選擇性篩選,篩選得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。

        穩定細胞株的構建周期長、難度大,每一步都很關鍵,尤其是細胞轉染,常用物理方法(電轉)、化學方法(脂質體等)、生物方法(病毒),根據不同的實驗條件,選擇好的方法,來達到實驗目的。

        康佰生物在穩定細胞株構建上擁有豐富的經驗,熟悉每一步操作,尤其對關鍵步驟有獨到的經驗,成功為眾多科研客戶構建目的細胞株(過表達、可誘導過表達、沉默、可誘導沉默、報告基因等等)。

        蛋白過表達:

        目的蛋白的過表達往往是研究該基因/蛋白功能的常規手段,也是借助表達系統富集蛋白(DHFR、GS system)的方法。蛋白過表達穩定細胞株的構建能很好的幫助研究這個蛋白,或者得到大量的目的蛋白。

        康佰生物提供的蛋白過表達穩定細胞株構建服務借助于真核表達載體/慢病毒系統,構建含有目的基因CDS的質粒/病毒,通過轉染/感染在各種細胞基因組上整合目的基因,利用抗生素篩選,得到穩定表達的高拷貝克隆,經過32代的穩定性QC檢測,完成穩定細胞株的構建工作。

        主要包含如下步驟:

        1. 載體構建(表達質粒載體、病毒載體);

        2. 轉染/感染;

        3. 目的蛋白初步檢測;

        4. 抗生素篩選;

        5. 目的蛋白再次檢測(定性/半定量);

        6. 單克隆細胞株穩定性檢測。

        特殊的過表達蛋白/細胞,請事先咨詢。

        蛋白沉默:

        目的蛋白的沉默(knock-down or knock-out)往往是研究該基因/蛋白功能的常規手段,蛋白沉默后細胞表型的檢測是科研的金標準方法。

        康佰生物提供的蛋白沉默穩定細胞株構建服務借助于真核表達載體/慢病毒系統,構建含有沉默目的基因(shRNA/microRNA)的質粒/病毒,通過轉染/感染在各種細胞基因組上整合沉默基因,利用抗生素篩選,得到高效沉默的克隆,經過32代的穩定性QC檢測,完成穩定細胞株的構建工作。

        主要包含如下步驟:

        1. 載體構建(沉默質粒載體、病毒載體);

        2. 轉染/感染;

        3. 目的蛋白初步檢測;

        4. 抗生素篩選;

        5. 目的蛋白再次檢測(定性/半定量);

        6. 單克隆細胞株穩定性檢測。

        特殊的過表達蛋白/細胞,請事先咨詢。

        誘導系統:

        外源蛋白的誘導表達/沉默能很好比較本底和干預的區別,非常有力的詮釋目的基因/蛋白的作用機理,特別適合研究自身具有毒性的蛋白,現已經被廣泛使用。

        康佰生物提供可誘導蛋白表達/沉默穩定細胞株構建服務借助于真核表達載體/慢病毒系統,構建含有“開關”控制表達/沉默目的基因的質粒/病毒,通過轉染/感染在各種細胞基因組上整合載體,利用抗生素篩選,得到可誘導的穩定細胞株,經過32代的穩定性QC檢測,完成穩定細胞株的構建工作。

        主要包含如下步驟:

        1. 載體構建(誘導質粒載體、病毒載體);

        2. 轉染/感染;

        3. “開關”誘導下目的蛋白初步檢測;

        4. 抗生素篩選;

        5. “開關”目的蛋白再次檢測(定性/半定量);

        6. 單克隆細胞株穩定性檢測。

        特殊的過表達蛋白/細胞,請事先咨詢。

        服務說明:

        1. 穩定細胞株構建依據目的不一樣,方案差異非常大,成功率差異也很大,本著對客戶負責的態度,建議事先咨詢,并且安排預實驗;

        2. 客戶可以提供基因序列、載體、細胞,也可以查找本公司模板庫、載體庫、細胞庫,也可以由我們公司代購;

        3. 本服務僅對目的基因的表達、穩定性做保證,不涉及基因功能,具體基因功能檢測,需要另外評估和收費;

        提交的產品和資料:

        1. 構建好的質粒(4ug/病毒(1ml),含目的基因序列/沉默序列/誘導序列;

        2. 穩定細胞株2管;

        3. 實驗報告。


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