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        技術文章
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        慢病毒包裝服務中如何進行預實驗
        點擊次數:269 發布時間:2022-07-15
           慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜,再往里依次為基質蛋白和衣殼,最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶。慢病毒包裝服務是將客戶的目的基因的cDNA序列連接到不同的慢病毒載體上,通過包裝獲得過表達目的基因的慢病毒顆粒。為了節省病毒,推薦使用96孔板進行預實驗。操作步驟如下:
         
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          將目的細胞接種于96孔板中,細胞融合率為50%為最佳。為保證細胞生長良好,請保證細胞貼壁過夜。
         
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          取10μL慢病毒原液加入90μL培養液中做1:10稀釋(10-1),以此為起點做梯度稀釋直至稀釋10-7??筛鶕嶋H情況降低或提高稀釋倍數。
         
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          取出提前準備好的96孔板,用準備好的病毒稀釋液替代舊培養液,注意保留未加入病毒的細胞孔作為對照組。
         
         ?、艿诙潦煊^察熒光或檢測
         
          慢病毒對細胞的感染較慢,請在感染細胞后48、72、96、120小時分別觀察細胞中熒光表達情況(如果您選擇的產品不帶有熒光標簽,請在48、72、96、120小時分別收獲細胞并通過Western-Blot或其他檢測手段來檢測基因表達)。
         
          注意:
         
          由于不同細胞對慢病毒感染過程的承受能力不同,在加入病毒稀釋液后,請于12-24小時后觀察細胞狀態以確認加入的病毒量是否合適。
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